Contaje de reticulocitos.

Podemos observar los reticulocitos al microscopio óptico mediante la tinción con colorantes vitales, azul de metileno nuevo o azul de cresil brillante.

Estos colorantes san lugar a la precipitación de los restos de ARN y se observan como filamentos de color azul intenso en el interior de la célula.

Según el grado de maduración que posea el reticulocito presentara un modelo de reticulocito distinto, de ovillo denso en el caso de los mas inmaduros o de granulas escasos para los mas maduros. Se pueden clasificar en 4 grupos:

Grado uno o célula joven.

Grado dos.

Grado tres.

Grado cuatro o célula vieja.

Muestra utilizada.

Sangre aiticoagulada.

Material utilizado.

• Un microscopio.
• Dos portaobjetos.
• Tubos de hémolisis.
• Pipetas pasteur.
• Varilla.
• Sistema de filtración.
• Embudo.
• Baño de María.

Reactivos.

• Azul de cresil brillante en polvo.
• Solución salina 0'9%.
• citrato sodico 3%.
• agua destilada.
• Aceite de inmersión.

Secuenciación y procedimiento seguido.

1. Preparación del colorante:
   Mezclamos 80ml de solución salina y 20ml de citrato sódico al 3%. pesamos 1gr de azul cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla y filtramos antes de usarlo.
2. Tinción de los reticulocitos:
   Es una tinción supravital, es decir, se hace mientras las células aun están vivas. Para ello echamos 3 gotas de la solución colorante en un tubo de hemólisis y otras 3 gotas de sangre total previamente homogenizada.
3. Extender la gota de saliva con ayuda del otro poraobjetos.
4. Mezclamos suavemente y tapamos con papel parafilm. Introducimos en el baño de maría a 37ºC durante 5 minutos.
5. Pasado este tiempo volveremos a homogenizar y tomaremos una gota de suspensión para depositar en un porta y realizar una extensión y dejarla secar al aire.

• Descripción y registro de los resultados.
  Con ayuda de aceite de inmersión observamos la extensión con el objetivo de 100x.
  Los hematíes se habran teñido de color verde amarillento y los reticulocitos se diferencian porque se presentan en su interior unos hilos finos de color azul.
  Se deben contar 2000 hematíes en total y el calculo del porcentaje de reticulocitos es el siguiente:

%reticulocitos=nº de reticulocitos contados x 100

nº de hematíes contados

Para descartar errores en la ténica debemos realizar dos extensiones y hacer el recuento en ambas de manera que la diferencia entre ellas sea igual o menor a 5 reticulocitos.

El resultado final es la media de los dos % obtenidos.

Actividades.

1. ¿ Qué son los reticulocitos?
   Son eritrocitos inmaduros que contienen un retículo o red cromatinica formada por restos de ARN, mitocondrias y orgánulos celulares.
2. ¿ Qué tipo de tinción estamos utilizando?
   Una tinción supravital.
3. ¿Porque hacemos la corrección del porcentaje de reticulocitos?
   Por que cuando existe una anemia con disminución en cantidad de hematíes se compensa con el aumento en el nº de reticulocitos y debemos corregir su valor en % para poder considerarlo real.