Si el tubo D presenta aglutinación y el tubo A no, decimos que el paciente es Rh positivo.

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN TUBO. 5/5/15

INTRODUCCIÓN

Para la realización de estas técnicas (en porta o en tubo) empleamos unos sueros anti-D que pueden ser de dos tipos: salino o albuminoideo. Estos últimos son los más utilizados y se preparan en un medio enriquecido con albúmina.

Los hematíes pueden revertirse in vivo de anticuerpos o proteínas anormales, y en presencia de albúmina producir una agregación que daría la idea de una aglutinación positiva. Por ello empleamos un control de albúmina, de manera que si aparece aglutinación en este tubo debemos repetir la prueba, pero usando un suero anti-D en medio salino.

Fundamento

Al igual que en la prueba en portaobjetos, intentamos poner de manifiesto la presencia del antígeno D en la superficie de los hematíes median su enfrentamiento a un suero anti-D.

Material necesario

• Tubos de centrífuga.
• Rotulador de vidrio.
• Gradilla.
• Pipetas Pasteur.
• Centrífuga.

Reactivos

• Suero anti-D.
• Albúmina bovina al 30%.
• Solución salina fisiológica (al 0,9%).

Muestra

• Hematíes problema preparados en suspensión al 5%.

Antes de proceder a suspender los hematíes debemos lavarlos tres veces en solución salina fisiológica. Para ello tomamos un volumen aproximado de 0,5 ml de la sangre problema y la llevamos a un tubo de centrífuga. Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente para resuspender los hematíes. Centrifugamos durante 4 minutos al 2.000 r.p.m. Posteriormente retiramos el sobrenadante y repetimos el proceso dos veces más.

El sedimento hemático resultante se resuspende en la cantidad de solución salina necesaria para obtener una suspensión al 5%.

Técnica

1. Rotulamos dos tubos limpios con las letras D y A.
2. En el tubo D añadimos una gota de suero anti-D y el tubo A ponemos una gota de albúmina bovina al 30%.
3. A cada tubo le añadimos una gota de la suspensión de hematíes al 5%. Agitamos suavemente para mezclar el contenido de los tubos.
4. Centrifugamos durante 1 minuto a 1.000 r.p.m o 30 segundos a 3.5000 r.p.m.

Lectura de resultados

Con el pulpejo de los dedos medio y anular golpeaos suavemente el fondo de los tubos para despegar el botón hemático.

Se considera aglutinación positiva si se forman grumos de color rojo en un líquido claro.

Por el contrario, si se resuspenden homogéneamente los hematíes, decimos que la aglutinación es negativa.

El tubo con albúmina es un control negativo, y debe dar siempre ausencia de aglutinación. En caso de no ser así, el resultado de la prueba no es válido.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Si no se produce aglutinación en ninguno de los dos tubos procedentes a incubar ambos a 37°C durante media hora. Posteriormente centrifugamos a 1.000 r.p.m durante un minuto y observamos si existe o no aglutinación.

En el caso de persistir la negatividad comprobaremos que el paciente no posee un Dᵁ (D débil) mediante una prueba de Coombs indirecta.

Si después de todos estos pasos el resultado es la no aglutinación, informaremos que el paciente es Rh negativo.

ACTIVIDADES.

1. ¿Por qué utilizamos el control de albúmina ? para saber si la prueba es válida.
2. ¿Qué ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D? que no es Rh positivo
3. ¿Qué decimos detectar mediante un Coombs indirecto ? que el paciente no posee un Du (débil ).
4. ¿Como se prepara la muestra problema ? Cojo 2 tubos de centrifuga y la añado 0,5 ml de sangre de la bolsa problema y le añado suero salino hasta la mitad del tubo para igualarlos y lo meto en la centrifuga a 2000 r.p.m por 4 minutos.Le retiro el sobrenadante y repito la misma operación de lavado  2 veces más.El sedimento que me queda cojo 5 gotas y las pongo en otro tubo y le añado 5 ml de suero salino,la homogeneizo y esta es la suspensión que necesito para analizar.

Resultados obtenidos

	Aglutinación
Sección S	+
Sección A	-

Valoración de los resultados

La sangre analizada es:

 Rh positivo