Tinción de Giemsa. 6/11/14

Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa, para diferenciar las distintas estructuras que conforman las células.

• Muestra utililzada.

Sangre anticoagulada.

• Material utilizado.

• Tubos de ensayo.
• Microscopio óptico.
• Pipetas pasteur con chupete
• portas bien limpios.
• Puentes de tinción.
• Frasco lavador.
• Cristalizador.

• Reactivos.

Colorante en solución según Giemsa de Panreac, y solución tampón pH 7´2 de Pareac.

• Secuenciación y procedimiento seguido.

1. Preparamos un frotis sanguineo.

2. Colocamos el frotis sobre el puente de tinción en el cristalizador y en posición horizontal.

3. Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y lo dejamos secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis.

4. Diluimos en un tubo de ensayo 0´2ml de azul-eosina de metileno según Giemsa con 2ml de solución tampón pH 7´2. Es importante realizar esta disolución en el momento de la tinción, ya que el colorante precipita y no es válido para otro dia.

5. Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta pasteur cubrimos el frotis con la disolucion de colorante, dejandolo actuar durante 25 minutos.

6. Escurrimos y lavamos con agua del grifo teniendo cuidado a no estropear la extensión. Posteriormente lavamos con tampón pH 7´2 hasta eliminar los restos de colorante. Dejamos escurrir y secar en posición vetical.

• Descripción y registro de resultados.

Una vez seca la tinción, echamos una gota de aceite de inmersión y examinamos al microscopio óptico con el objetivo de 100x.

Los eritrocitos se tiñen de color rosa asalmonados y las plaquetas de color violeta. Los neutrofilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo. Los eosinofilos se observan con el núcleo azul violeta, el citoplasma azul y los gránulos de color anaranjado.

Los basófilos presentan un núcleo de color purpura y granulación de color azul oscuro. Los monocitos y linfocitos se observan con un núcleo color violeta y el citoplasma azul, un poco mas claro en el monocito.

Actividades.

1. ¿ Cuáles son los anticoagulantes mas adecuados para esta técnica?
   EDTA y heparina.
2. ¿ Con qué reactivo fijamos el frotis?
   Metanol.

3. ¿ Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis?
   25 minutos.