PRUEBA CURZADA MAYOR. 22/5/15

INTRODUCCIÓN

El objetivo de las pruebas pre-transfusionales es detectar La posibles reacciones antígeno-anticuerpo entre la sangre del donante y del receptor, antes de la transfusión-

Por ello, es imprescindible realizar una serie de determinaciones que se especifican a continuación:

1. Tipaje correcto del grupo AB0 y Rh del donante y del receptor. Siempre se intentará transfundir sangre del mismo grupo del receptor, y si no es posible, se usará una sangre compatible.
2. Escrutinio de los anticuerpos irregulares del receptor: Si se detectan anticuerpos irregulares, deberán ser identificados para administrar sangre que carezca de los antígenos correspondientes. No es imprescindible realizar esta determinación en la sangre del donante, ya que el volumen de plasma transfundido es pequeño en comparación con el plasma del receptor, pero sí es conveniente hacerla para evitar todo tipo de riesgos.
3. Prueba cruzada mayor. Trata de determinar la incompatibilidad entre las sangres enfrentando el suero del receptor con los hematíes del donante.

Otras pruebas que también pueden realizarse son: la prueba cruzada menor, donde se enfrentan el suero del donante con los hematíes del receptor, y un autocontrol, donde se buscan Autoanticuerpos mediante el enfrentamiento entre el suero del receptor y sus propios hematíes.

La prueba cruzada menor sólo se realiza cuando se transfunde una gran cantidad de plasma, ya que en este caso, la presencia de anticuerpos en la sangre del donante puede ser peligrosa. El empleo de concentrados de hematíes hace innecesaria la realización de esta prueba.

Todas estas pruebas deben realizarse en medio salino y en medio albuminoso, para detectar todos los anticuerpos presentes.

Fundamento

Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante; primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso, y por último frente al suero antiglobulina de Coombs. Con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.

Material necesario

• Tubos de hemólisis.
• Centrífuga.
• Pipetas Pasteur.
• Gradilla.
• Reloj.

Reactivos

• Solución salina fisiológica.
• Albúmina bovina al 30%.
• Suero antiglobulina de Coombs.

Muestra

• Suero del receptor, obtenido se sangre coagulada y libre de hemólisis. Debe ser fresco (menos de 24 horas desde la extracción) y conservado a 4°C.
• Hematíes del donante, previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica y resuspendidos en ella al 2-5%.

Técnica

1. En un tubo de hemólisis depositamos una gota de la suspensión de hematíes del donante y 2 gotas del suero del receptor.
2. Mezclamos suavemente, y dejamos a temperatura ambiente durante 2-3 minutos.
3. Centrifugamos a 3.500 r.p.m durante 30 segundos.
4. Leemos el resultado obtenido en medio salino.
5. Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina bovina al 30%.
6. Mezclamos bien e incubamos a 37°C durante 30 minutos.
7. Centrifugamos a 3.500 r.p.m durante 30 segundos.
8. Leer el resultado obtenido en medio albuminoso.
9. Lavamos tres veces los hematíes con solución salina para eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. Retirar bien todo el sobrenadante el último lavado.
10. Añadimos al tubo una gota de suero antiglobulina humana de Coombs. Mezclar bien.
11. Centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 2 minutos.
12. Leemos los resultados.

Lectura de resultados

La lectura de los resultados se realiza resuspendiendo el botón hemático con suavidad después de cada una de las centrifugaciones.

En caso de reacciones débiles positivas, conviene observar al microscopio entre porta y cubre con objetivo de 40x.

INTERPRATACION CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

La ausencia de aglutinación en todos los pasos indica que las sangres son compatibles, y por tanto, la transfusión es posible.

La aglutinación en cualquiera de las fases de la prueba indica incompatibilidad.

Si se observa hemólisis en cualquiera de los pasos, también es signo de incompatibilidad.

En ocasiones es conveniente realizar esta prueba en medio enzimático. Dado que el empleo de enzimas como de Bromelina o la Papaína refuerza las reacciones antígeno-anticuerpo, esta prueba se usa para re-examinar a los receptores que han sufrido reacciones trasnfusionales.

ACTIVIDADES.

1. ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor ? suero del receptor y hematíes del donante.
2. ¿Cuándo se debe realizar la prueba cruzada menor ? cuando se enfrenta el suero del donante con los hematíes del recetor.
3. ¿ Por qué  debemos realizar la prueba en medio salino y albumininoideo ? Para detectar todos los antígenos presentes.
4. ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs ? Para detectar los anticuerpos que hayan quedados fijados a la membrana eritrocitaria.

Resultados obtenidos

	Resultados
Medio salino	NO AGLUTINA
Medio albuminoso	NO AGLUTINA
Suero antiglobulina	NO AGLUTINA

Valoración de los resultados

Las sangres analizadas son:

Compatibles