DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA. 22/4/15

INTRODUCCIÓN

La detección celular del grupo ABO puede realizarse mediante una técnica en porta o en tubo.

En ambos casos, los hematíes problema, que contienen sustancias antigénicas (aglutinógenos) del sistema ABO, se enfrentan con antisueros (aglutininas) dirigidos contra esos antígenos.

El resultado final de esta determinación consiste en la aglutinación directa de los eritrocitos cuando reacción contra el antisuero que les corresponde.

Para estos estudios in vitro se utilizan anticuerpos anti-A, anti-B y anti-AB procedentes de donantes o que se obtienen mediante síntesis con hibridomas de linfocitos sensibilizados y células de mieloma múltiple (Ac monoclonales*). Sin embargo, como aglutininas anti-A1 o anti-H se utilizan lectinas.

Las lectinas o fitoaglutininas son proteínas presentes en algunas plantas, sobre todo en sus semillas, capaces de aglutinar a los hematíes humanos. Una de ellas, extraída de las semillas de la leguminosa Ulex europeaus, es capaz de aglutinar específicamente los hematíes que contienen sustancia H, y también es eficaz para detectar esta sustancia en la saliva, por lo que se utiliza para identificar a los individuos secretores. El extracto de la semilla de otra leguminosa, Dolichos biflorus, puede aglutinar a los hematíes A1 y A1B no aglutina a los hematíes A2, A2B B y O.

Es importante mencionar que todas estas determinaciones deben hacerse a temperatura ambiente, ya que la aplicación de calor puede afectar a los hematíes impidiendo observar una posible aglutinación.

Fundamento

Consiste en observar la aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros conocidos y de reconocida eficacia, para determinar el grupo ABO del individuo.

Material necesario

• Un portaobjetos o tarjeta visualizadora de fondo blanco.
• Un rotulador de vidrio.
• Una pipeta pasteur desechable.
• Palillos mezcladores.
• Un reloj.

Reactivos

• Suero anti-A.
• Suero anti-B.

Muestra

• Sangre capilar o sangre total anticoagulada, citratada u oxalatada.

Técnica

• Dividir un portaobjetos en dos secciones con el rotulador de vidrio. Marcar una con la letra A y otra con la letra B.
• Depositar una gota de suero anti-A (azul) en la sección A del portaobjetos, y una gota del suero anti-B (amarillo) en la sección B.
• Situar una pequeña gota de sangre (aproximadamente la mitad del volumen usado de antisuero) junto a la gota de antisuero.
• Mezclar ambas gotas en cada sección utilizando un palillo distinto en cada una de ellas y formando un círculo de 2 a 2,5 cm de diámetro.
• Hacer oscilar suavemente el portaobjetos hacia delante y hacia atrás, durante dos minutos.
• Observar la presencia o ausencia de aglutinación.

Lectura de resultados

Hay aglutinación cuando aparecen unos grumos rojos que flotan en un líquido claro. En el caso contrario, los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

La presencia o ausencia de aglutinación puede confirmarse mediante examen microscópico de las mezclas.

En general estas pruebas son muy eficaces ya que la presencia de plasma en la muestra aumenta la velocidad de la reacción y el tamaño de los grumos. El resultado puede observarse en unos segundos, aunque conviene reexaminar la reacción del anti-A al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil. Éstas suelen ocurrir en menos de un 1% de las muestras analizadas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

El grupo eritrocitario que se le asignará, atendiendo a los resultados obtenidos, se puede ver en el cuadro siguiente:

Hematíes y suero anti-A	Hematíes y suero anti-B	Grupo eritrocitario
+	-	A
-	+	B
+	+	AB
-	-	0

+ = presencia de aglutinación

˗ = ausencia de aglutinación

En el caso de que el grupo obtenido sea el A, los hematíes problema deberán ser ensayados de nuevo con lectina anti-A1: de forma que si se produce aglutinación, el sujeto pertenecerá al subgrupo A1.

ACTIVIDADES.

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis ? La aglutinación.
2. ¿Qué muestra utilizamos ? Sangre capilar.
3. ¿Cómo se ve la aglutinación positiva ?Grumos rojos que flotan sobre el líquido antisuero.
4. ¿Qué debemos hacer si el grupo obtenido es A? Reexaminar la reacción del anti -A1 al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil.

Resultados obtenidos

Valoración de los resultados

La sangre analizada es del grupo eritrocitario:

 A2