DETERMINACIÓN DE LA SIDEREMIA.21/1/15

METÓDICA

Extracto de la metódica del kit para la determinación de hierro sérico de la marca LiquiChem®, distribuido por la Casa MASTER-LABOR.

Fundamento

En primer lugar, el hierro férrico presente en la muestra y unido a la trasnferrina es liberado por la acción del guanidinio.

Seguidamente, el hierro férrico libre es reducido a ferroso por la hidroxilamina.

Posteriormente, el hierro ferroso reacciona con la ferrozina para producir un complejo coloreado.

Finalmente, la intensidad de formación del complejo coloreado es medida esprectrofotométricamente.

Material necesario

• 4 tubos de plástico de un solo uso.
• Un rotulador de vidrio.
• 2 pipetas graduadas de 1 ml.
• 1 pipeta automática capaz de dispensar 200 µl.
• Puntas de pipeta automática.
• 5 cubetas de espectrofotometría.
• Un espectrofotómetro.

Reactivos

• Reactivo 1.

Consta de los siguientes componentes:

Cloruro de guanidina 1M.

Hidroxilamina 0,6M.

Tampón acetato 0,4M.

• Reactivo 2.

Consiste en ferrozina 40mM.

• Reactivo de trabajo

Se prepara vaciando el contenido de un vial de reactivo 2 en el interior de un bote de reactivo 1. Tras ello, se agita suavemente la mezcla.

• Patrón de hierro.

Es una solución hierro a una concentración de 100µg/dl.

• Agua destilada.

Muestra

• Suero o plasma heparinizado.

No son válidas las muestras lipémicas o hemolizadas.

Técnica

1. Llevar los reactivos, el patrón y la muestra a temperatura ambiente o a 37 ⁰C.
2. Rotular 4 tubos de ensayo con las siglas BR ( Blanco de Reactivo), P (Patrón), BM (Blanco de Muestra) y M (Muestra).
3. Añadir a cada tubo lo siguiente:

	Blanco de Reactivo BR	Tubo Patrón P	Blanco de Muestra BM	Tubo Muestra M
Agua destilada (en ml)	200	-	-	-
Solución patrón ( en ml)	-	200	-	-
Muestra (en ml)	-	-	200	200
Reactivo 1 (en ml)	-	-	1	-
Reactivo de trabajo (en ml)	1	1	-	1

4. Agitar el contenido de todos los tubos.
   
5. Dejar que reaccionen los componentes de todos los tubos, durante 5 minutos, a temperatura ambiente.
6. Ajustar el espectrofotómetro a 560 nm.
7. Disponer el contenido de los tubos en cubetas de espectrofotometría.
8. Leer la absorbancia (A) del contenido del tubo BM (Blanco de Muestra) frene a agua destilada.
9. Leer la absorbancia (A) del contenido de los tubos P (Patrón) y M (Muestra) frente al contenido del tubo BR (Blanco de Reactivo).

Lectura de resultados

Los cálculos necesarios para obtener, a partir de las absorbancias obtenidas (A), la concentración de hierro en la muestra (la sideremia) son los siguientes:

Sideremia (en µg/dl) = A Muestra – A Blanco de Muestra / A del Patrón ↔ Concentración del Patrón

La concentración del patrón de hierro suministrado es de 100 g/dl.

Si se desea expresar los resultados en µmol/l = Sideremia en µg/dl ↔ 0,179.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Con eta técnica analítica, los valores normales de la sideremia son los siguientes:

Mujeres: 55 – 140 µg/dl.

Varones: 70 – 155 µg/dl.

Se observa una hiposideremia en la anemia ferropénica y en la anemia de las afecciones crónicas.

Se encuentra en aumento de la concentración de hierro sérico en todas las situaciones de sobrecarga de hierro, como la hemocromatosis idiopática y las anemias sideroblásticas.

Valoración de los resultados

Interprete los resultados obtenidos, indicando si están dentro de los límites normales para un individuo adulto.