DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO. 23/4/15

Fundamento

Los hematíes problema contienen las sustancias antigénicas del sistema ABO y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos.

El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes.

Material necesario

• Tubos de centrífuga.
• Rotulador de vidrio.
• Pipetas Pasteur.
• Centrífuga.
• Gradillas.

Reactivos

• Suero anti-A.
• Suero anti-B.
• Suero anti-AB.
• Solución salina fisiológica.

Muestra

• Sangre total anticoagulada. Para esta técnica es preferible usar una suspensión de los hematíes problema.

Técnica

1. En primer lugar realizamos el lavado de los hematíes problema. Para ello rotulamos convenientemente un tubo de centrífuga y añadimos 1 ml de la muestra de sangre. Completamos el tubo con solución salina y agitamos para suspender los hematíes. Centrifugamos 4 minutos a 2.000 r.p.m y decantamos el sobrenadante.
2. A los hematíes del tubo les añadimos una cantidad suficiente de solución salina como para obtener una suspensión al 2%. Esto es aproximado, aunque debemos establecer los límites entre el 2 y el 4%.
3. Rotular tres tubos de ensayo bien limpios con las letras A, B y AB.
4. Añadir a cada tubo una gota de la suspensión de hematíes al 2%.
5. Añadir dos gotas de suero anti-A en el tubo A, dos gotas de anti-B en el tubo B, y dos gotas de anti-AB en el tubo AB.
6. Centrifugamos todos los tubos durante 1 minuto a 1.000 r.p.m o 30 segundos a 3.000 r.p.m (centrifuga de inmunohematología)

Lectura de resultados

Después de centrifugar, golpeamos suavemente el fondo de cada tubo para desprender el sedimento y observar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación.

Reacción negativa: Los hematíes se resuspenden homogéneamente.

Reacción positiva: Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Se realizan igual que en la técnica en porta.

Es importante destacar que los restos de detergente o sustancias extrañas en los tubos pueden ocasionar falsos negativos.

También pueden darse falsos positivos, principalmente por dos motivos:

• Aglutinación no específica: Se debe a la presencia de ácido hialurónico en la sangre, procedente de la gelatina de Wharton del cordón umbilical, y se elimina añadiendo una gota de hialuronidasa a la suspensión de hematíes.
• Fenómeno de Rouleaux: Consiste en una agrupación no específica de hematíes, que adoptan una imagen de pilas de monedas. Las sustancias que más frecuentemente originan este fenómeno son: el fibrinógeno, las gammaglobulinas, el dextrano y la polivinilpirrolidona.

Estos fenómenos pueden evitarse con el lavado previo de los hematíes problema.

ACTIVIDADES.

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis ? La aglutinación.
2. ¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problema ? Al 2% o también se puede al 4 %.
3. ¿Cómo se ve una aglutinación positiva ? Se observa un botón de hematíes .
4. ¿A qué se debe el fenómeno de Rouleaux ?  al fibrinógeno, las gammaglobulinas ,el dextrano y la polivinilpirrolidona.
5. ¿Cómo pueden evitarse los falsos positivos ? Con el lavado previo de los hematíes problema 

Resultados obtenidos

Valoración de los resultados obtenidos

La sangre ensayada es del grupo eritrocitario:

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