DETERMINACIÓN DE  Dᵁ. 20/5/15

INTRODUCCIÓN

En algunos casos, los anticuerpos tipo IgG (o incompletos) son incapaces de producir la aglutinación de los hematíes por sí solos. Sin embargo, son capaces de adherirse a su superficie tanto in vivo como in vitro, y decimos que han sensibilizado a los hematíes. También son capaces de fijar el complemento, sin llegar a producir la hemólisis de los eritrocitos.

Estos anticuerpos tipo IgG pueden reaccionar con un suero de conejo en el que existen anticuerpos antiglobulina humana del tipo IgM (complementos). El resultado de esta reacción es una aglutinación de los hematíes.

Este suero antiglobulina humana es lo que llamamos suero de Coombs. Este suero puede ser de dos tipos:

• Poliespecífico, si está dirigido contra la IgG y contra el componente C3d del complemento.
• Monoespecífico, si está dirigido sólo contra la IgG o contra alguno de los componentes del complemento.

La prueba de Coombs o de la antiglobulina humana puede realizarse de dos modos:

• Prueba directa, donde intentamos detectar anticuerpos incompletos que han sensibilizado a los hematíes in vivo. Para ello los enfrentamos directamente al suero de Coombs y observamos si existe o no, aglutinación.
• Prueba indirecta, donde el paso previo es la sensibilización de los eritrocitos in vitro, para posteriormente hacerlos reaccionar con el suero de Coombs. En este caso buscamos anticuerpos incompletos libres en el suero, o poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los hematíes

Fundamento

El Dᵁ es un antígeno D débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación del Rh. Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Dᵁ en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana, en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.

Es una prueba de Coombs indirecta.

Material necesario

• Tubos de centrífuga o de hemólisis.
• Centrifuga.
• Pipetas Pasteur.
• Gradilla.
• Baño de agua.
• Reloj.

Reactivos.

• Suero antiglobulina humana de conejo (suero de Coombs).
• Solución salina fisiológica.

Muestra

• Hematíes de la sangre problema previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica, y suspendidos al 5% en dicha solución.

Técnica

1. En un tubo de hemólisis colocamos una gota de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5%.
2. Mezclamos suavemente e incubamos a 37°C durante 30-45 minutos.
3. Después de incubar, lavamos los hematíes en solución salina fisiológica tres veces consecutivas.

Decantamos completamente la solución salina después del último lavado.

4. Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs, y mezclamos suavemente.
5. Centrifugamos el tubo a 1.000 r.p.m durante un minuto.

Lectura de resultados

Observamos la aparición o no de aglutinación, mediante golpes suaves en el fondo del tubo. En caso de duda, observamos al microscopio entre porta y cubre con el objetivo de 40x.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Si existe aglutinación, el resultado es positivo. Indica que en la membrana de los hematíes hay antígenos Dᵁ, y se clasifica la sangre como Rh positivo variante Dᵁ.

En el caso de no existir aglutinación se clasificará la sangre como Rh negativo.

Para evitar falsos positivos debido a una sensibilización previa de los hematíes in vivo, debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes problema. Esto nos servirá como control negativo.

ACTIVIDADES.

1. ¿Qué contiene el suero de Coombs ? suero antiglobulina humana de conejo.
2. ¿Qué se detecta con la prueba directa ? un falso positivo.
3. ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta? un Rh + Du (débil).
4. ¿Qué buscamos en la sangre del paciente ? antígeno Du.
5. ¿Qué ocurre si el control es positivo ? que la membrana de los hematíes del aciente hay antígeno Du

Resultados obtenidos

	Aglutinación
Sección S	+
Sección A	-

Valoración de los resultados

La sangre es:

 Rh positivo