DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO. 27/4/15

INTRODUCCIÓN

La clasificación correcta del grupo sanguíneo en la sangre del donante y del receptor es un paso fundamental en el acto transfusional. Para ello, es imprescindible confirmar el resultado de la prueba celular con la determinación sérica del grupo sanguíneo. En el caso de que no se disponga de suero para realizar esta prueba, se recomienda que otro técnico compruebe el resultado de la determinación celular.

Fundamento

El suero de un individuo sólo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes- Por ello, al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B, sólo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes.

Esta técnica puede realizarse tanto en porta como en tubo, aunque ser prefiere la determinación en tubo porque la centrifugación de los hematíes intensifica el fenómeno de aglutinación.

Material necesario

• Tubos de centrifuga.
• Pipetas Pasteur.
• Baño de agua.
• Centrifuga.
• Reloj.
• Rotulador de vidrio.
• Gradilla.

Reactivos

• Hematíes del grupo A1.
• Hematíes del grupo A2.
• Hematíes del grupo B.
• Hematíes del grupo 0.
• Hematíes de la sangre problema.

Muestra

• Suero obtenido mediante coagulación de la sangre en baño de agua a 37°C durante 20 a 30 minutos.

Posteriormente centrifugamos durante 10 minutos a 3.000 r.p.m y extraemos el sobrenadante con ayuda de una pipeta Pasteur.

Técnica

1. Para evitar falsos negativos por la presencia de complemento activo en el suero, es aconsejable la inactivación previa de la muestra. Esto se realiza manteniendo el suero en un baño de agua a 56°C durante 10 minutos. Con esto evitamos los fenómenos de hemólisis debidos al complemento.
2. Lavamos tres veces los hematíes propios de la sangre problema con solución salina isotónica según la técnica descrita en la práctica XVIII. Posteriormente preparamos una suspensión de estos hematíes al 5% en solución salina.
3. Rotulamos un tubo de centrífuga con la letra A1, otro con la letra A2, otro B, otro 0 y otro C.
4. Añadimos a cada tubo dos gotas del suero problema inactivado.
5. Depositamos una gota de la suspensión de hematíes que se corresponda con la letra del tubo rotulado. En el tubo C añadimos una gota de la suspensión de los hematíes propis de la sangre problema, ya que nos servirá de control negativo.
6. Agitamos suavemente y centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 1 minuto.

Lectura de resultados

Golpeamos suavemente el extremo inferior de los tubos para despegar el sedimento hemático.

Si aparecen unos grumos rojos flotando en un líquido claro indica que existe aglutinación. En el caso contrario, los hematíes se resuspenden homogéneamente dando lugar a un líquido de color rojizo.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

El grupo eritrocitario que se asignará, atendiendo a los resultados obtenidos, se puede ver en el siguiente cuadro:

Tubo A1	Tubo A2	Tubo B	Tubo 0	Tubo C	Ac presentes en el suero	Grupo eritrocitario
-	-	+	-	-	Anti-B	A1
- o +*	-	+	-	-	Anti-B y anti-A1*	A2
+	+	-	-	-	Anti-A	B
+	+	+	-	-	Anti-A y anti-B	0
-	-	-	-	-	Ninguno	A1B
- o +*	-	-	-	-	Ninguno o Anti-A1	A2B
+	+	+	+	+	Autoanticuerpos	Ininterpretable

+ = Aglutinación

˗ = No aglutinación

* = Este anti-A1 se encuentra sólo en un 2% de los individuos A2.

Ó = Este resultado se observa sólo en el 25% de los individuos A2B.

Es difícil confirmar el grupo sanguíneo por esta técnica en el caso de los recién nacidos, ya que sus anticuerpos no están bien desarrollados aún. También encontramos dificultades en los pacientes con agammaglobulinemia, ya que carecen de anticuerpos, y en aquellos que poseen otros anticuerpos específicos o inespecíficos capaces de reaccionar con los antígenos del grupo AB0.

Discrepancias entre la prueba celular y la sérica

En el caso de no obtener el mismo resultado en ambas pruebas debemos proceder de la siguiente manera:

1. Repetir ambas pruebas.
2. En el caso de persistir la discrepancia, so obtendrá una nueva muestra de sangre y se realizarán ambas pruebas utilizando hematíes lavados y resuspendidos correctamente a la concentración óptima de cada técnica.
3. Efectuar una prueba de Coombs directo sobre los hematíes para detectar posibles Autoanticuerpos.
4. Realizar la prueba sérica utilizando un panel de screening con hematíes A1, A2, B, 0.

Causas del a discrepancia entre la prueba celular y sérica

Las causas más frecuentes obedecen a tres tipos distintos:

1. Errores técnicos:

• Identificación incorrecta de las muestras o anotación de los resultados.
• No añadir todos los reactivos y muestras correspondientes.
• Contaminación de los reactivos o hematíes del panel de screening.
• Proporción inadecuada de muestra y reactivos.
• Sobrecentrifugación o centrifugación insuficiente.
• No valorar la hemólisis considerándola como aglutinación negativa.

2. Problemas con la muestra:

• Presencia de Autoanticuerpos.
• Antígenos A o B débiles, congénitos o adquiridos.
• Especificidad B adquirida en pacientes A1 por una infección bacteriana.
• Inmunodeficiencias congénitas o adquiridas.
• Fenómenos de Rouleaux.

ACTIVIDADES.

1. ¿Que son los hematíes tipados ? son los que sabemos de que grupo son.
2. ¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente? al 5%
3. ¿Qué clase de muestra se emplea en esta técnica ? suero del paciente inactivado o plasma.
4. ¿Qué ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación ? Que hemos cometido algún error.

Resultados obtenidos

	Aglutinación	No aglutinación
Tubo A1
Tubo A2	+
Tubo B
Tubo 0
Tubo C

Valoración de los resultados

• Los Ac encontrados en el suero son:

_ Anti-A2 _ Autoanticuerpos

• El grupo eritrocitario de la sangre analizada es:

 A